叶酸测定培养基样本浓度的测定步骤

　　

　　叶酸测定培养基用法

　　

　　称取本品9.4g,另称取50mg抗坏血酸,加热溶解于100ml蒸馏水中,分装试管,每管5ml,使沉淀物分散均匀,加入标准品或测试样品,用蒸馏水补体积至10ml,121℃高压灭菌5分钟,备用。

　　

　　正常人的血清叶酸水平正常为9.9ng/ml。在身体异常或得病时，叶酸水平会显著变化。叶酸干酪培养基采用干酪乳杆菌（ATCC7469）为测定用菌，用于叶酸的微生物法测定。该培养基是基于Flynn等人(1)的配方，并经Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于维生素测定的测定菌通常需要三种培养基：维持培养基、接种培养基和测定用培养基。后者通常是化学限定的培养基，包含所有测定菌生长所需的养分，但不含有待测的分子。类似的，叶酸干酪培养基包含干酪乳杆菌生长所需的所有成分，但不包含叶酸。因而，添加一系列浓度增加的叶酸，会观察到干酪乳杆菌生长反应的递增。

　　

　　样本叶酸浓度的测定步骤：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他体积的制备好的血清提取物。加入5ml叶酸干酪培养基和足量的蒸馏水，使每个试管的总体积为10ml。15磅121°C灭菌5分钟。冷却试管并向每个试管中加入一滴接种液。35-37℃孵育18-24小时后进行浊度读数。读数前将试管冷藏15-30分钟以停止细菌生长。620nm检测吸光度。待测样品中的叶酸含量应根据标准曲线来确定，不过要考虑样品稀释度。

　　

　　叶酸测定培养基质量控制

　　

　　Ø外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末

　　

　　Ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀

　　

　　Ø配比浓度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.7±0.1

　　

　　ØpH值——6.60-6.80