单增李斯特菌的检测方法

传统检测方法

食品中单增李斯特菌的传统检测方法包括增菌、分离和鉴定 3 个环节。目前，分离环节常会采用显色培养基，使其菌落颜色不同于其它干扰菌，实现快速分离。这里推荐HiMedia公司（微生物培养基生产商）生产的李斯特菌显色培养基（HiCrome标识，货号MV1540）。由于单核细胞增生李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌具有相似的生化特性，传统培养基（PALCAM培养基）不能区分，使用HiMedia李斯特菌显色培养基（MV1540）可有效区分单增李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌，且它在制备时用无疯牛病风险的植物蛋白胨取代了动物蛋白胨，安全可靠。

鉴定常采用生化反应和血清学反应。目前，生化反应的鉴定技术多采用数值分类鉴定和自动化检测技术。该技术主要包括：（1）HiMedia公司的HiBio-IDTM李斯特菌生化鉴定卡（货号：KB012A）或HiBio-IDTM动力学李斯特菌生化鉴定卡（货号：KBM003A）、API Listeria 生化鉴定试纸条。（2）全自动微生物分析系统，HiMedia公司HiBio-IDTMReader全自动李斯特菌生化鉴定仪、VITEK 系统、MIDI 系统及 BIOLOG 系统等。

单增李斯特菌的检测除传统检测方法外还有多种快速检测方法，主要应用于增菌以后，生化鉴定之前，对阴性样本进行快速筛选，以缩小检测范围，减少检测任务，提高检测效率及准确率。快速检测方法主要包括免疫学和分子生物学检测两大类。

免疫学检测法

该技术以抗原抗体免疫为基础，制备特异性克隆抗体检测细菌。目前国内外李斯特菌快速检测的此类技术主要包括：酶联荧光分析法(ELFA)、金标免疫层析技术、流式细胞技术等。ELFA灵敏度比ELISA高，并省去了ELISA中的颜色反应，缩短反应时间；但缺点是成本较高，目前主要应用在自动酶联荧光免疫检测系统(VIDAS)上。

金标免疫层析技术是将高度特异性抗单增李斯特菌抗原的抗体束缚在色原载体上，且可与固相支撑基质相分离。当检测样品中存在李斯特菌时，测试单元的试剂将会被展开，产生肉眼可见的确定性反应。流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数。

分子生物学检测方法

分子生物学检测方法主要包括核酸探针杂交技术、PCR检测技术等。DNA探针法是将两条碱基互补的DNA链在适当的条件下杂交，通过检测样品与标记性DNA探针之间形成的杂交分子来检测样品中的单增李斯特菌，测定放射性或荧光强度即可得出样品中单增李斯特菌的个数。PCR是近年来广泛应用的分子生物学检测方法，在单增李斯特菌的检测中以其遗传物质高度保守的核酸序列（常用的靶序列包括hly、actA、prfA等）设计引物进行扩增。

该方法特异性好，但灵敏度低，对样品进行前处理后再进行扩增，可以提高检出率和检测灵敏度。PCR技术还可对单增李斯特菌进行定量检测。国内外目前主要应用的PCR技术包括：实时荧光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒温扩增、RT-PCR方法、IMS-PCR检测技术等。