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HiCynth™改良煌绿琼脂基础培养基

更新时间:2017-09-08  |  点击率:1221

HiCynth™改良煌绿琼脂基础培养基,经改良后用于选择性分离伤寒沙门氏菌之外的沙门氏菌,样本是粪便、食物和奶制品。

 

组成:

成分                             g/L

HiCynth™蛋白胨5号     3.000

HiCynth™蛋白胨4号     10.000

乳糖                            10.000    

蔗糖                            10.000

氯化钠                           5.000

酚红                              0.080

煌绿                             0.0125

琼脂                             20.000

zui终pH值(25℃)      6.9±0.2

 

使用指导:

在1000ml蒸馏水中重悬29.05g培养基干粉。必要时加热以*溶解。高压灭菌(15磅121℃,15分钟)。避免过热。凉至45-50℃。要提高选择性,可无菌加入1管水化的磺胺类添加剂(#FD068),混匀后倒入无菌平板。

 

原理和说明:

沙门氏菌引起多种类型的感染,从轻微的自限性胃肠炎到危及生命的伤寒。zui常见的沙门氏菌病是自限性胃肠炎,发热持续不到2天,腹泻持续不到7天。

 

 

HiCynth™改良煌绿琼脂基础培养基为分离沙门氏菌的主要培养基,是由Kristensen等人描述1。考夫曼进一步改进2美国公共卫生学会3FDA4,5也推荐使用煌绿琼脂,欧洲药典、英国药典和印度药典也描述了这一方法6,7,8

 

 

该培养基含有煌绿,能抑制大多数革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长。伤寒沙门氏菌、志贺菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌被广泛抑制。临床标本可直接接种在该培养基上。但是,由于高度选择性,推荐该培养基与其他较少抑制作用的培养基一起使用,以增加恢复率的机会。

 

 

该培养基包含有HiCynth™蛋白胨4号和HiCynth™蛋白胨5号提供必要的氮源和碳源的化合物、长链氨基酸、维生素,还有其他必需的营养成分。乳糖和葡萄糖是能量来源,它们在培养基中发酵形成酸性pH值,可被酚红指示剂检测到。氯化钠维持培养基的渗透压平衡。煌绿抑制可能带来污染的微生物菌落。当样本怀疑有大量的竞争菌时,可向该培养基添加磺胺醋酰(1g/L)和扁桃酸钠(0.25g/L)。

 

 

非乳糖发酵菌在培养18-24小时后形成白色至粉红色菌落。伤寒沙门氏菌和志贺菌不会在这种培养基上生长。此外,变形杆菌、绿脓杆菌、枸橼酸杆菌属可能会模仿肠道菌产生红色的小菌落。

 

质量控制

外观

淡黄色至淡粉色均一松散粉末

 

成胶性

结实,相当于2.0%琼脂糖凝胶

 

制备好的培养基颜色和透明度

在平皿中为透明棕绿色至轻微乳白色凝胶

 

pH值(25℃)

6.70-7.10

 

培养反应

30-35℃培养24-48小时。恢复率以细菌在大豆酪蛋白水解琼脂上生长为100%

微生物

接种量(CFU

生长状况

批次值(CFU)

恢复率

菌落颜色

伤寒沙门氏菌ATCC 14028

50-100

生长旺盛

25-100

≥50%

粉白色

阿博尼沙门氏菌NCTC 6017

50-100

生长旺盛

25-100

≥50%

粉白色

肠炎沙门氏菌ATCC13076

50-100

生长旺盛

25-100

≥50%

粉白色

伤寒沙门氏菌ATCC 6539

50-100

生长良好

15-40

30-40%

红粉色

大肠杆菌ATCC 25922

50-100

基本不生长

0-10

0-10%

黄绿色

大肠杆菌ATCC 8739

50-100

基本不生长

0-10

0-10%

黄绿色

大肠杆菌 NCTC 9002

50-100

基本不生长

0-10

0-10%

黄绿色

金黄葡萄球菌ATCC 25923

≥10³

抑制

0

0%

 

金黄葡萄球菌ATCC 6538

≥10³

抑制

0

0%

 

 

储存和保质期

30℃以下密闭保存。配好后的培养基2-8℃保存。在标签上的截止日期前使用。

 

参考文献:

1.  Kristensen M., Lester V, and Jurgens A., 1925,Brit.J.Exp.Pathol.,6:291.

2.  Kauffman F., 1935, Seit F. Hyg. 177:26.

3.  Downes F. P. and Ito K. (Ed), 2001, Compendiumof Methods for Microbiological Examination of Foods, 4th Ed. APHA,WashingtonD.C.

4.  Standard Methods for the MicrobiologicalExamination of Dairy Products, 1995, 19th Ed, APHA, Washington, D.C.

5.  Bacteriological Analytical Manual, 5th Ed,1978, AOAC, Washington D.C.

6.  The European Pharmacopoeia, 2014, Council orEurope, Strasbourg.

7.  The British Pharmacopoeia, 2016 vol. II,London.

8.  Indian Pharmacopoeia, 2014, Ministry of Healthand Family Welfare, Govt., of India.

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