如何准备用于生长促进曲线测定的细胞

　　要进行细胞生长曲线的测定，来反映FBS的功能，需要先准备足够的有活力的细胞。缔一生物/缔一生物根据美国药典（USP）的描述分析如何准备用于生长促进曲线测定的细胞。

　　用37℃水浴快速解冻一管FBS。计数细胞并观察活力。用添加FBS的*培养基在37℃培养细胞，具体遵循ATCC对相应细胞提供的指导。镜下观察，保证细胞均一分布，贴壁或悬浮接近长满。细胞再传代，直至培养的细胞数足够用于检测（总细胞数需要1X107个，活力大于90%）。

　　收获细胞时，先弃掉上清，用不含FBS的培养基冲洗；对贴壁细胞，加1 mL of Trypsin/EDTA消化，必要时用1ml不低于10%FBS的培养基中和。离心，弃上清，细胞重悬。此时，细胞即可用于接种。

　　接种细胞时，应测试*的接种密度，起始密度范围为2×103~2×104活细胞/mL。选取至少5个时间点，3个复孔，以确定细胞*接种密度。在37℃，5%CO2的培养箱孵育。对7天内的每个时间点的培养细胞进行拍照（第0,1,2,3,4,7天）。应采用待测试的血清和USP的参考血清，测试三种血清浓度。记录下每种条件下细胞的汇合度。在预定的时间点上收获细胞。对细胞总数和活力进行计数。

　　综上所述，您是不是已经对如何准备用于生长促进曲线测定的细胞，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询缔一生物/缔一生物资深专家。